کلونینگ مولکولی
مقاله اصلی: کلونینگ مولکولی
تصویر انتقال
یکی از بنیادین ترین تکنیک های پاورپوینت فیزیک دوازدهم مولکولی برای بررسی عملکرد پروتئین ، کلونینگ مولکولی است. در این تکنیک ، کدگذاری DNA برای پروتئین مورد علاقه با به کارگیری بازتاب زنجیره ای پلیمراز (PCR) و / یا آنزیم های اندک کننده در پلاسمید (بردار بیان) کلون می شود. یک وکتور 3 ویژگی جدا دارد: منشاء تکثیر ، یک سایت کلونینگ چندگانه (MCS) و یک نشانگر انتخابی معمولاً پایداری آنتی بیوتیکی. مناطق بالادست از سایت کلونینگ متعدد مناطق پروموتور و سایت آغاز رونویسی هستند که بیان ژن کلون شده را تنظیم می کنند. این پلاسمید را می تاب در سلول های باکتریایی یا حیوانی وارد کرد. شناسایی DNA در سلولهای باکتریایی می تواند از راه جذب DNA DNA برهنه ، کونژوگه از طریق تماس سلول یا سلول از راه بردار ویروسی اتمام شود. معرفی DNA به سلولهای یوکاریوتی ، مثل سلولهای حیوانی ، به وسیله فیزیکی یا کیمیایی ، ترانسفکشن نامیده می شود. چندین طریق گوناگون ترانسفکشن در دسترس هستند ، از جمله ترانسفکشن کلسیم فسفات ، الکتروپوراسیون ، میکرواینجکشن و انتقال لیپوزوم. پلاسمید شدنی است در ژنوم یکپارچه شود ، برآیند اینکه یک ترانسفکشن استوار باشد ، یا شدنی است از ژنوم مستقل بماند ، به اسم ترانسفکشن گذرا. [12]
کدگذاری DNA برای پروتئین مورد علاقه الان در تو یک سلول قرار دارد و پروتئین هم اکنون می تواند بیان شود. گونه ها سیستم ها ، از آنگونه پروموتورهای القایی و فاکتورهای ویژه سیگنال دهی سلول ، در ذکر پروتئین علاقه در سطوح بالا در دسترس هستند. مقادیر زیادی پروتئین از سلول باکتری یا یوکاریوتیک بیرون می شود. پروتئین را می نا برای فعالیت آنزیمی تحت شرایط مختلف تست کرد ، پروتئین شدنی است متبلور شود بنابراین می تاب ساختار سوم آن را باره مطالعه قرار داد ، یا در صنعت داروسازی می توان فعالیت داروهای جدید در برابر پروتئین را مورد مطالعه قرار داد. [14]
واکنش زنجیره ای پلیمراز
مقاله اصلی: واکنش رشته ای پلیمراز
واکنش سلسله ای پلیمراز (PCR) یک تکنیک زیاد متنوع برای کپی کردن DNA است. به طور خلاصه ، PCR دستور می دهد لغایت یک دنباله DNA خاص به طریق های از قبل تعیین شده کپی یا اصلاح شود. این واکنش بسیار نیرومند است و در شرایط عالی می تواند یک مولکول DNA را تقویت کند الی در کمتر از دو ساعت به 1.07 میلیارد مولکول تبدیل شود. از روش PCR می نا برای شناسایی سایت های آنزیمی اندک کننده به انتهای مولکول های DNA یا جهش پایه های ویژه DNA بهره‌گیری کرد ، دومی روشی است که به عنوان جهش زایی سایت به کار می رود. PCR در ضمن می تواند برای تعیین اینکه آیا یک تکه DNA خاص در یک کتابخانه cDNA یافت می شود ، باره استفاده پیمان گیرد. PCR دگرگونی ها زیادی دارد ، مانند رونویسی معکوس PCR (RT-PCR) برای تقویت RNA ، و اخیراً ، PCR کمی که امکان اندازه گیری کمی از مولکول های DNA یا RNA را فراهم می کند. [15] [16]
الکتروفورز ژل
مقاله اصلی: الکتروفورز ژل
دو درصد ژل آگارز در بافر بورات در یک سینی ژل ریخته می شود.
الکتروفورز ژل یگانه از ابزارهای اصلی پاورپوینت فیزیک دوازدهممولکولی است. ریشه-بن-بیخ اساسی این است که DNA ، RNA و پروتئین ها با استفاده از یک میدان الکتریکی و اندازه می توانند از هم جدا شوند. در الکتروفورز ژل آگارز ، DNA و RNA می توانند براساس اندازه از راه اجرای DNA از طریق ژل آگارز با بار الکتریکی از هم جدا شوند. پروتئین ها را می طاقت بر بنیاد اندازه با استفاده از ژل SDS-PAGE یا بر پای بست، اندازه و بار الکتریکی آنها با استفاده از آنچه به عنوان الکتروفورز ژل 2D شناخته می شود ، از هم جدا کرد. [17]
پاورپوینت فیزیک دوازدهم
اصطلاحات وسترن بلات ، غربی و شرقی از آنچه در نخست یک مزاح زیست شناسی مولکولی بود که با اصطلاح بلاتینگ جنوبی بازی می کرد ، حاصل می شود ، بعد از تکنیک توصیف شده توسط ادوین جنوبی برای هیبریداسیون DNA blotted. پاتریشیا توماس ، گسترش دهنده تقسیم RNA که در آن سررسید به عنوان تکه شمالی سرشناس شد ، واقعاً از این اصطلاح کاربرد نکرد. [18]
بلات جنوبی
مقاله اصلی: بلات جنوبی
South Blot روشی که بعد از مخترع آن ، پاورپوینت فیزیک دوازدهم نامگذاری شده است ، روشی برای رسیدگی هستی یک توالی DNA خاص در یک مثال DNA است. نمونه های DNA قبل یا بعد از هضم آنزیم محدود کننده (اندونوکلئاز اندک کننده) بدست الکتروفورز ژل از هم جدا می شوند و با به کارگیری عمل مویرگی به یک غشای منتقل می شوند. غشاها سپس در معرض یک پروب DNA برچسب خورده قرار می گیرند که یک توالی پایه مکمل به دنباله روی DNA باره علاقه دارد. [19] لکه های جنوبی به انگیزه گنجایش دیگر تکنیک ها ، مشابه PCR ، برای تشخیص توالی DNA ویژه از نمونه های DNA ، در علوم آزمایشگاهی کمتر مورد کاربرد قرار می گیرد. این لکه ها هنوز هم برای برخی از برنامه ها مورد کاربرد پیمان می گیرد ، همانند اندازه گیری شمار کپی ژن های تراریخته در موش های تراریخته یا مهندسی ساخت ژن های سلول های اساسی جنینی.
